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          SILAC+IP-MS-蛋白質互作定量分析整體服務

          SILAC+IP-MS-蛋白質互作定量分析整體服務

          型號:   更新時間:2023-10-23

          簡要描述:

          SILAC+IP-MS-蛋白質互作定量分析整體服務 利用IP純化蛋白質復合物時,除了能捕獲到Target蛋白及其互作蛋白之外,細胞中一些與抗體/抗體偶聯材料(agarose、magnetic beads等)高親和的蛋白質也會被一起捕獲下來(非特異性粘附蛋白),并且這些蛋白都是高豐度的。

          品牌上海創凌供貨周期現貨
          應用領域醫療衛生,環保,化工,生物產業,農業

          SILAC+IP-MS-蛋白質互作定量分析整體服務簡介:

          利用IP純化蛋白質復合物時,除了能捕獲到Target蛋白及其互作蛋白之外,細胞中一些與抗體/抗體偶聯材料(agarose、magnetic beads等)高親和的蛋白質也會被一起捕獲下來(非特異性粘附蛋白),并且這些蛋白都是高豐度的。故而,在后續的LC-MS鑒定時,這些非特性的蛋白質會被高頻率的檢測到。這就帶來了一個很困擾的問題:由于沒有定量信息,在眾多鑒定到的蛋白質中,如何才能排除非特性的粘附蛋白,找出真正的、與target特異性互作的蛋白。

          將SILAC和IP技術相結合,借助SILAC引入質量差異,IP完成后,蛋白質復合物通過LC-MS分析,可同時完成定性(即鑒定,給出樣品中有那些蛋白質)和定量(給出每個蛋白質被IP富集的相對程度)。根據定量結果結合軟件統計分析,即可直接區分出那些是target特異性的相互作用蛋白(SILAC ratio>1.0),那些是非特異性的粘附蛋白(SILAC ratio=1.0)。從而快速篩選和鎖定特異性的相互作用分子,后續生物學驗證成功率明顯提高。

          技術和實驗方案”高、大、上“,能顯著提高文章的檔次。

          SILAC+IP-MS-蛋白質互作定量分析整體服務方案:

          客戶只需提供基因名稱和細胞株即可,我方負責完成后續所有實驗,包括:

          基因克隆與慢病毒制備。

          穩定細胞株構建與鑒定。

          細胞SILAC標記及標記效率檢測。

          細胞擴增培養。

          IP純化蛋白質復合物并SDS-PAGE分離。

          切割條帶,LC-MS測試分析。

          MS數據定性和定量分析,依據SILAC的定量值(SILAC ratio)篩選潛在的互作蛋白。

          挑選潛在的候選驗證蛋白(6個)進行后續驗證。承諾6個驗證蛋白,至少給出1個陽性的互作。

          參考文獻:

          Nat Immunol 2014, 15(2):112-117.

          Proc Natl Acad Sci U S A 2014, 111(51):18219-18224.

          Science 2013, 340(6131):475-478.

          Nat Cell Biol 2013, 15(6):625-636.


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