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          Balance CD 293無血清培養基

          Balance CD 293無血清培養基

          型號:CW001   更新時間:2023-10-23

          簡要描述:

          Balance CD 293無血清培養基含有細胞生長所需的全部營養成份,無需添加任何添加物即可使用。(注意:此培養基不包含抗生素以及血清)

          貨號CW001規格1L
          供貨周期現貨主要用途適用于懸浮培養條件下的HEK293細胞(如293-F,293-T, Expi-2
          應用領域醫療衛生,環保,化工,生物產業,農業

          產品名稱: Balance CD 293無血清培養基現貨*

          產品品牌:CELL-WISE

          產品規格:1L

          產品貨號:CW001

          產品描述:

          Balance CD 293 培養基適用于懸浮培養條件下的HEK293細胞(如293-F,293-T, Expi-293F等)的高密度生長和瞬時轉染表達。 Balance CD 293 培養基含有細胞生長所需的全部營養成份,無需添加任何添加物即可使用。(注意:此培養基不包含抗生素以及血清)

          產品特點:

          瞬時轉染培養基,適用于HEK293細胞高密度懸浮培養

          無蛋白、無動物源、化學成分限定

          即用型*培養基,無需添加額外成分

          Balance CD 293無血清培養基現貨*基礎參數:

          外觀:

          澄清透明紅色液體

          滲透壓:

          275±15 mOSM

          pH:

          6.9-7.4

          無菌檢測:

          無菌

          內毒素:

          <5 EU/mL

          儲存條件:

          2-8℃,避光

          效期:

          12個月

          產品用途:

          僅用于科學研究,不適用于人類或動物的診斷和治療

           

          產品使用方法:

          細胞馴化

          1)直接馴化

          大部分情況下,培養于其他培養基中的細胞,可以直接適應Balance CD 293 medium,只要按照日常傳代方式(稀釋)更換培養基即可。

          2)漸進式馴化

          注意:選用低代次、處于對數生長期的細胞進行馴化

          在原培養基中復蘇細胞并繼續使用該培養基傳代2到3次至細胞生長穩定,當細胞密度達到2x10 6 cells/ml后進行傳代,傳代細胞密度控制在0.5-0.6×10 6 cells/mL,5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293培養基的比例為75:25;

          將細胞置于37℃,5% CO2,轉速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養;

          當細胞密度3-4天后達到3x10 6 cells/ml且細胞活率>90%,傳代時5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293培養基的比例為50:50,細胞密度控制在0.5×10 6 cells/mL。如細胞生長慢,可離心上清,留20%條件培養基,加入80%的5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293 培養基比例為75:25的混合培養基,繼續培養;

          重復步驟逐步增加Balance CD 293培養基所占的比例(5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293 培養基的比例為25:75至10:90)直到100%的Balance CD 293培養基;

          經過在100%的 Balance CD 293 培養基中的幾次傳代培養,傳代后3-4天細胞的密度可以達到2-3×10 6  cells/mL,細胞活率大于90%,這說明細胞已經*適應了Balance CD 293 培養基。之后進行細胞的傳代培養時,細胞的起始密度可以降到0.3×10 6 cells/mL,一般傳代2-3次后再進行轉染實驗。

          注意: 一般細胞馴化過程中,前三代細胞的狀態可能不是很好,但一般從第四代狀態會有改善。

          細胞傳代

          1)取細胞培養樣品,人工或儀器測定細胞密度以及活率;

          2)計算傳代所需的細胞用量,建議起始細胞密度為0.2-0.4×10 6 cells/mL。建議復蘇的細胞至少培養兩代后再用于其他用途。傳代培養體積建議為15-20 mL(100 mL的培養瓶)或50-60 mL(250 mL 的培養瓶);

          3)將細胞置于37℃,5%CO2,轉速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養,3-4天傳代一次。

          細胞轉染在Balance CD 293培養基中,采用商業化轉染試劑(例如 Gibco 293Fectin™ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit )或 PEI 可以實現對 HEK293 細胞的高效轉染。

          細胞復蘇

          1)迅速取出凍存的細胞,在37℃水浴條件下進行解凍(可以在水中輕輕晃動,時間控制在60s以內);

          2)輕輕地混勻細胞并將融化的細胞全部移至15ml無菌離心管中,逐滴加入10ml預熱到37℃的培養基,離心換液(100g,5min)去除全部上清,加入新鮮培養基重懸,使得細胞密度達到0.4-0.66cells/ml;

          3)將細胞置于37℃,5%CO2,轉速為110-175rpm的恒溫搖床中進行培養;

          4)2-4天后通過人工或儀器測定細胞的密度及活率,如果細胞密度達到1.0*106cells/ml,活率達到85%以上則可進行傳代培養;

          5)如果細胞密度低于1.0*106cells/ml,則建議對細胞進行離心(100g,5min),然后重懸于20-30ml的新鮮培養基中使得細胞密度為0.4-0.6*106cells/ml左右,并繼續培養至細胞正常生長則可進行傳代培養。

          細胞凍存

          1)凍存細胞時,要選擇處于對數生長期同期細胞活率在90%以上的HEK293cells;

          2)事先計算好凍存的細胞管數和所用的培養基的體積;

          3)制備細胞凍存液:46.25%的新鮮Balance CD 293培養基+46.25%條件Banance CD 293培養基,混合之后再加入7.5%DMSO,存放在4℃,一般為當天用當天制備;

          4)對細胞樣品進行計數;

          5)取樣計數,以100g,3-5min的條件離心收集細胞,然后用凍存培養基(4℃)重懸細胞,使得細胞密度為5-10*106cells/ml;

          6)取樣計數,調整細胞密度;迅速分裝細胞到無菌的凍存管中,一般2ml的凍存管1-1.5ml,貼好標簽,密封;

          7)將細胞凍存管放到程序降溫凍存盒(注意填充異丙醇,4℃預冷)中,置于-80℃冰箱(每分鐘下降1℃),過夜存放后將細胞轉入液氮罐中進行保存。

           

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